A cisgenia vem sendo cada vez mais uma tendência nos trabalhos de transformação genética. Em citros, a utilização de genes da mesma espécie ou de gêneros próximos já vem sendo utilizada em nossos laboratórios desde o primeiro programa INCT Citros. No entanto, os vetores utilizados na transformação, contem genes indesejáveis como os de seleção e repórter. Estes genes facilitam a obtenção e identificação dos transformantes, mas após esta fase não são mais necessários na planta. A exclusão destes genes da planta transformada seria muito desejável, permanecendo apenas o gene que confere a característica de interesse agronômico. Com isso, a aceitação do público e os trâmites para liberação comercial poderiam ser muito facilitados. Considerando estes pontos, a utilização de novos vetores para transformação genética seria um avanço tecnológico para a cultura.

Diversas metodologias já foram relatadas em literatura empregando a tecnologia chamada “marker-free” (Vanblaere et al, 2014, Han et al., 2011, Holme et al., 2012). Entre estas, destaca-se a que utiliza a recombinase sítio específica que pode ser utilizada em espécies propagadas vegetativamente (como os citros). Por exemplo, o vetor pMF utiliza a atividade da recombinase R induzida quimicamente (Schaart et al., 2004) para remover o marcador de seleção (resistência a antibióticos, herbicidas, etc.) bem como o marcador repórter (GUS, GFP). Esta tecnologia já foi empregada em tabaco, morango e maçã (Schaart et al., 2004; Vanblaere et al., 2011).

Sendo assim, o presente projeto propõe avaliar a utilização deste vetor e esta tecnologia em citros, analisando parâmetros como número de transformantes obtidos, eficiência de transformação, tempo para regeneração da planta transformada, entre outros. Além disso, será utilizado um outro vetor a série pCambia sem o gene de seleção (ou seja, sem resistência a antibiótico). Neste vetor, o gene de seleção será substituído pelo gene que confere aumento no teor de antocianina na planta, chamado CsRuby. Este e um fator de transcrição da família MYB que foi isolado de laranja sanguínea (polpa vermelha). Com isso, a seleção será baseada na coloração avermelhada das plantas transformadas, além de produzir plantas com aumento no valor nutricional, no caso antocianinas.